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抗體細純化試劑盒

簡要描述:一、原理
本試劑盒采用Protein A和protein G純化法。Protein A/G 可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結合。Protein A/G 作為配基可以被偶聯到瓊脂糖凝膠上,當抗血清從中流過時,特異性的IgG就與配基結合,其他雜蛋白則穿流而過。因兩種蛋白純化抗體時對不同宿主的抗體的結合能力不同,需要具體選擇protein A 或者protein G,或者是protein A/pro

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2019-04-28
  • 訪  問  量:1354
詳情介紹
  • 原理

本試劑盒采用Protein A和protein G純化法。Protein A/G 可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結合。Protein A/G 作為配基可以被偶聯到瓊脂糖凝膠上,當抗血清從中流過時,特異性的IgG就與配基結合,其他雜蛋白則穿流而過。因兩種蛋白純化抗體時對不同宿主的抗體的結合能力不同,需要具體選擇protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G組合。一般推薦小鼠單抗IgG2a,IgG2b,IgG3,兔,人,豬的多克隆抗體用protein A純化,而小鼠單抗IgG1,大鼠單抗,小鼠,大鼠,山羊的多克隆抗體則選擇用protein G純化。

  • 產品特點
  1. 試劑盒內含有分析所需的所有必需試劑,操作簡單便捷;
  2. 試劑盒內組分經實驗優化,確保更高的檢測靈敏度;
  3. 保存條件:2-8
  4. 規格:待純化抗體1-5ml

三、所需材料

儀器:離心管(1.5 mL、50mL)、0.45µm濾膜、注射器、氣流控制器

試劑:去離子水

四、 試劑盒組成

組成部分

裝量

A柱

1ml

B液

50ml

C液

5 mL

D液

2 mL

E液

10 mL

F液

10 mL

 

  • 純化步驟
  1. 樣品準備:將抗血清與B液1:5混合,用0.45µm濾膜過濾(防止堵塞柱子)。
  2. 平衡柱子:用10mL去離子水洗去F液,再用5-10倍體積的B液過A柱。
  3. 上樣:將準備好的血清樣品上樣,控制流速20s/滴。
  4. 洗脫雜蛋白:用B液洗柱子,直至結合液中不含蛋白。
  5. 收集抗體:用C液過柱,同時收集漏出液(約0.5-1m1/管), 直至漏出液中不含蛋白。
  6. 測定各收集管中的蛋白含量,合并蛋白管。(注意:收集管中需事先加入約10-200u1的D液,防止抗體在過酸的環境下失活)
  7. 柱子再生:用5-10倍體積的E液再生柱子。
  8. PBS 透析收集的抗體。
  • 注意事項
  1. 待純化抗血清及試劑盒溶液根據體積大小需要回溫1-3小時。
  2. 根據柱子的結合能力考慮上樣量的體積。
  3. 將所純化的抗體加入10%-20%的甘油置于-20攝氏度或者-80攝氏度即可長期保存。
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