小鼠抗血清ELISA效價(jià)測(cè)定檢測(cè)試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量

檢測(cè)血清的效價(jià)。

二、適用范圍

定量檢測(cè)動(dòng)物血清的效價(jià)。

三、所需材料

儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：單道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

試劑：去離子水

小鼠抗血清ELISA效價(jià)測(cè)定檢測(cè)試劑盒說明書

五、 試劑盒組成

六、溶液配制

配液: 洗滌工作液

   用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋，用于酶標(biāo)板的洗滌，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月，用前一天取出回溫。

七、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行下步檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

② 樣本數(shù)目超過8個(gè)時(shí)推薦使用排槍加樣。

血清（稀釋倍數(shù)：1000、2000、5000、10000）

① 取血清按以上稀釋倍數(shù)依次稀釋1000、2000、5000、10000倍混勻；

② 取100μL用于分析。

八、 酶標(biāo)免疫測(cè)定程序

① 將所有所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其*回升至室溫后方可使用，根據(jù)體積大小不同取出回溫的時(shí)間從1小時(shí)~2小時(shí)。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

②  按標(biāo)血清稀釋液和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。

③  加血清稀釋液/血清：加血清稀釋液/血清100µL 到對(duì)應(yīng)的微孔中，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。

④  洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，

加入洗滌工作液300 µL/孔，每次靜置20s，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗滌3次，最后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

⑤ 加酶標(biāo)物：加入酶標(biāo)物100 µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光孵育30 min。

⑥ .甩干孔內(nèi)液體，重復(fù)洗板3次，最后一次用吸水紙拍干。

⑦ 顯色：加入底物液A液50 µL/孔，再加底物    

液B液50 µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。

⑧ 測(cè)定：加入終止液50µL/孔，用酶標(biāo)儀立即  測(cè)定450/630nm處的吸光度值。

九、 結(jié)果判定

以OD值≥1.0為標(biāo)準(zhǔn)。

血清稀釋倍數(shù)≤2000倍OD值≥1.0的判斷為低效價(jià)，血清稀釋倍數(shù)在2000~5000倍OD值≥1.0的為中等效價(jià)，血清稀釋倍數(shù)在≥5000倍OD值≥1.0的為高等效價(jià)（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件，以便進(jìn)行大量樣本的分析計(jì)算。）

十、 注意事項(xiàng)

① 根據(jù)體積大小不同取出回溫的時(shí)間從1小時(shí)~3                                                          小時(shí)，體積15毫升以上的優(yōu)先從冷藏環(huán)境取出 回溫。

②  洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

③ 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

④不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號(hào)的試劑。

⑤ 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

⑥ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為10min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時(shí)間到15-20min，反之則減短反應(yīng)時(shí)間。

⑦ 底物液B液長期使用變?yōu)闇\藍(lán)色時(shí)，請(qǐng)放心使用，不影響檢測(cè)結(jié)果。

⑧ 未提及樣本請(qǐng)致電本公司技術(shù)服務(wù)部。

十一、貯藏條件及保存期

    貯藏條件： 2～8℃

保 質(zhì) 期： 12個(gè)月

十二、問題與對(duì)策      

（見下頁）