豬藍(lán)耳病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書

Service manual of ELISA Kit for PRRS Virus antibody

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】豬藍(lán)耳病（PRRS）是一種高致病率、高死亡率的病毒病，給國(guó)內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的損失。在免疫預(yù)防工作中，接種了疫苗后，由于多種因素可能導(dǎo)致豬不產(chǎn)生或產(chǎn)生低水平藍(lán)耳病病毒抗體。

本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)豬血清中PRRSV抗體，用于免疫疫苗后抗體動(dòng)態(tài)水平監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)免疫預(yù)防工作，評(píng)估豬場(chǎng)藍(lán)耳病免疫狀況，也可用于藍(lán)耳病的流行病學(xué)調(diào)查。

【豬藍(lán)耳病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書產(chǎn)品內(nèi)容】

【成分性狀】

【用法與判定】 按以下步驟進(jìn)行：

1、需要自備的器材

1.1 微量移液器；

1.2 微量移液器配套使用的槍頭；

1.3 用來(lái)稀釋洗滌液的500ml量筒；

1.4 適用于檢測(cè)96T微孔板的酶標(biāo)儀；

1.5 用于稀釋樣品的1.5ml Ep管；

1.6 蒸餾水或去離子水。

2、樣品的制備

用樣品稀釋液將待檢血清樣品進(jìn)行50倍稀釋(建議：4μl血清樣品加入196μl樣品稀釋液中)，樣品加入包被板前要充分混勻，稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意：①制備血清用的血液樣本應(yīng)無(wú)溶血現(xiàn)象發(fā)生；②不能稀釋陰性、陽(yáng)性對(duì)照。

3、操作步驟 （﹡使用前應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或震蕩予以混勻，所有試劑應(yīng)恢復(fù)至室溫）

3.1 在A1和A2孔中分別加入100μl陰性對(duì)照；

3.2 在A3和A4孔中分別加入100μl陽(yáng)性對(duì)照；

3.3  取100μl稀釋好的待檢樣品加入相應(yīng)孔中，并做好記錄；

3.4 37℃孵育30min；

3.5  將各孔的液體棄入廢液桶，每孔加250μl的洗滌液（試劑盒內(nèi)20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋后方可使用。如有結(jié)晶，需先溶解后，方可進(jìn)行稀釋）進(jìn)行洗板，重復(fù)5次，每次30s；

﹡加液時(shí)防止各孔間洗滌液串流影響檢測(cè)結(jié)果，盡量將孔內(nèi)洗滌液拋甩干凈；

3.6 每孔加100μl酶標(biāo)結(jié)合物；

3.7  37℃孵育30min；重復(fù)步驟3.5；

3.8 每孔加100μl底物液；

3.9  37℃孵育10min（避光顯色）；

3.10  每孔加50μl的終止液；

3.11  立刻于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值，即OD₄₅₀值。

4、試驗(yàn)有效性判斷

4.1陰性對(duì)照：正常情況下，陰性對(duì)照孔OD₄₅₀值≤0.3；

4.2陽(yáng)性對(duì)照：正常情況下，陽(yáng)性對(duì)照孔OD₄₅₀值≥0.6；

4.3臨界值(C.O.)計(jì)算：臨界值=0.18+陰性對(duì)照均值；陰性對(duì)照OD₄₅₀值大于0.3時(shí)應(yīng)舍棄，如所有陰性對(duì)照OD₄₅₀值均大于0.3時(shí)須重復(fù)實(shí)驗(yàn)；陰性對(duì)照低于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。

4.4結(jié)果判定： 檢測(cè)樣品OD₄₅₀值≥臨界值，判定該檢測(cè)樣品為陽(yáng)性； 檢測(cè)樣品OD₄₅₀值＜臨界值，判定該檢測(cè)樣品為陰性。

【注意事項(xiàng)】

（1）待檢血清樣品數(shù)量過(guò)多時(shí)，應(yīng)先使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋完畢后，再統(tǒng)一將血清樣品加入酶標(biāo)板中，使反應(yīng)時(shí)間一致。

（2）試劑盒使用的過(guò)程中不要吸煙、喝水和吃東西。

（3）底物液和終止液對(duì)皮膚有刺激性，注意防護(hù)。

（4）底物液不要暴露于強(qiáng)光和任何氧化劑；使用潔凈的玻璃和朔料容器處理底物液。

（5）所有試劑應(yīng)在2～8℃存放；使用前恢復(fù)到室溫，使用后放回2～8℃。

（6）注意防止試劑盒組分受到污染。

（7）不要使用超過(guò)有效期的試劑，不同批次試劑盒的組分不要混用。

（8）操作過(guò)程中的移液、時(shí)間和洗滌必須精確。

【規(guī)格與包裝】96T×2

【貯藏與有效期】2～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月

僅供獸醫(yī)診斷使用

長(zhǎng)期提供原核、真核蛋白表達(dá)構(gòu)建服務(wù)

長(zhǎng)期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務(wù)